Microscopía Confocal

Dotación instrumental

Microscopio de Escaneo Laser Confocal Nikon con las siguientes características: 

• Microscopio Invertido motorizado Nikon Eclipse Ti-E con objetivos: Plan Fluor 10x, Plan apocromáticos 20x, 40x, 60 oil,
• Detector de transmisión
• Módulo de epi-fluorescencia motorizado
• Accesorio confocal Spinning Disk de alta velocidad tipo Yokogawa CSU-X1
• Accesorio confocal de barrido Nikon C2+
• Bancada de láseres única Nikon LU-4A para los dos accesorios
• Software de control Nikon NIS-Elements C

Técnicas

El microscopio laser confocal emplea un sistema laser como fuente lumínica, y con él va barriendo una pequeña parte de la muestra, así como todo su volumen, sección a sección, generando imágenes en diferentes planos focales que por medio de un procesado digital de las mismas, puede reproducir una imagen tridimensional del material observado. La alta resolución de las imágenes resultantes se debe a la omisión de toda la información fuera de foco que degrada la imagen en la microscopía convencional. El láser aplicado a una determinada longitud de onda sobre una muestra, hace que las moléculas excitadas, emitan fluorescencia a una longitud de onda mayor a la aplicada. La fluorescencia en una muestra puede estar presente de forma natural o puede ser producida por moléculas artificiales denominadas fluorocromos.  El microscopio confocal es especialmente ventajoso para observar especímenes fluorescentes, ya que además de eliminar las zonas fuera de foco, solamente ilumina en cada momento regiones puntuales de la muestra por medio de unos diafragmas denominados pinholes que están localizados antes y después de la muestra, eliminándose con ello el efecto de "blanqueado" que induce sobre la fluorescencia una iluminación continuada.

Prestaciones

Microscopio de Escaneo Laser Confocal Nikon con las siguientes características:

• Microscopio Invertido motorizado Nikon Eclipse Ti-E, con sistema de enfoque en Z motorizado, con objetivos: Plan Fluor 10x, Plan apocromáticos 20x, 40x, 60 oil, con juego de filtros específicos de alta transmisión para DAPI (UV), FITC (Azul) y TRITC (Verde).
• Detector de transmisión
• Módulo de epi-fluorescencia motorizado, con equipo led de: 380nm, 470 nm y verde/rojo.
• Accesorio confocal Spinning Disk de alta velocidad tipo Yokogawa CSU-X1, con espejo dicroico cuádruple, con rueda de filtros de 10 posiciones.
• Accesorio confocal de barrido Nikon C2+, con velocidad de escaneo de hasta 100 fps. Permite visualizar imágenes de alta resolución y en vivo. Modos de escaneo: 2D, 3D, 4D, rotación XY, zoom, escaneo puntual, mosaico de imágenes, con sistema de detección simultanea de 3 fluorocromos.  Intervalo de longitudes de onda: 400-700nm
• Bancada de láseres única Nikon LU-4A para los dos accesorios confocales, con cuatro láseres de alta potencia: Láser diodo violeta de 403, láser diodo azul de 488 nm láser diodo amarillo de 561 nm y láser diodo rojo de 640.
• Software de control Nikon NIS-Elements C, permite el mosaico de imágenes, imágenes 3D, con módulo de localización, puede aplicarse a la imagen entera o a zonas de interés (ROI), permite experimentos multidimensionales (X, Y, Z, tiempo, longitud de onda y posiciones de la platina motorizada) para los dos equipos confocales.

Aplicaciones

Algunas de las aplicaciones más importantes de estas técnicas son:

Microscopio de Escaneo Laser Confocal:

• Análisis de localización de marcadores.
• Inmunofluorescencias y detección de sondas.
• Análisis tridimensional de muestras biológicas, células, tejidos, organismos, biofilms.
• Reconstrucciones 3-D de grandes estructuras.
• Series Temporales  (Time Series), experimentos in vivo y a tiempo real.
• Estudios de adquisición simultánea o secuencial de una preparación en 2D, 3D y 4D.
• Colocalización
• Estudios estructurales de materia blanda (coloides, polímeros,  geles, espumas, etc.)
• Dinámica de polímeros y partículas coloidales (microreología)