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Detalle del equipamiento del laboratorio

a) Expresión y purificación de proteínas

En el laboratorio es posible llevar a cabo el clonaje de un gen de una proteína de interés dentro de un plásmido y su inserción en células bacterianas (como E. coli) para poder obtener una gran cantidad de esa proteína.
Además es posible realizar la mutagénesis dirigida de dicha proteína para estudios posteriores de caracterización de mutantes.

Todo ello gracias a que el laboratorio cuenta con una serie de aparatos: campana de flujo laminar, balanzas de precisión, incubador orbital, estufa de cultivos, electroforesis de geles, centrífugas y congelador vertical de -80ºC.

Una vez obtenidos los cultivos celulares es necesario extraer la proteína de interés del interior de las células (sonicador, centrífuga) y purificarla mediante la separación de las distintas proteínas del extracto mediante la utilización de columnas (siendo necesarias bomba peristáltica y colector de fracciones).

Para la visualización de las proteínas presentes en un extracto se separan en función de su peso molecular (electroforesis en geles de acrilamida).




2) CARACTERIZACIÓN DE PROTEÍNAS

2.1 Caracterización de la estructura de proteínas mediante UV-VIS y espectrofotometría.

Espectrofotómetro UV-Vis Cary-Bio50 con accesorio de Stopped-flow

Espectrofluorímetro Perkin-Elmer LS-50B

2.2. Equipo de purificación, separación y caracterización de proteínas

Sistema HPLC-FPLC Äkta Basic (General Electric)

2.3. Equipo de alta sensibilidad: Calorímetro diferencial de barrido (DSC) (VP-DSC, Microcal LLC)

Determina directamente la capacidad calorífica de moléculas biológicas en solución y el calor de reacción del proceso de desnaturalización térmica. Es adecuado para estudiar reacciones de desplegamiento térmico de moléculas biológicas.

Calorímetro diferencial de barrido (DSC) (VP-DSC, Microcal LLC)

2.4. Equipo de alta sensibilidad: Calorímetros de valoración isotérmica (ITC) (MCS-ITC y VP-ITC, Microcal LLC)

Equipos de alta sensibilidad para el seguimiento de reacciones de unión de moléculas biológicas y ligandos, permitiendo la determinación simultánea de la afinidad de unión y la entalpía de unión de un ligando a una proteína o de unión de dos proteínas.